fluorescence filter သည် fluorescence microscope တွင် မရှိမဖြစ်လိုအပ်သော အစိတ်အပိုင်းတစ်ခုဖြစ်သည်။ ပုံမှန်စနစ်တွင် အခြေခံစစ်ထုတ်မှု သုံးခုပါရှိသည်- လှုံ့ဆော်မှု စစ်ထုတ်မှုတစ်ခု၊ ဓာတ်ငွေ့ထုတ်လွှတ်မှု စစ်ထုတ်မှုနှင့် ဒိုက်ခ်ရိုအီမှန်တစ်ခု။ ၎င်းတို့ကို အဏုကြည့်မှန်ပြောင်းထဲသို့ တစ်စုတစ်စည်းတည်း ထည့်သွင်းနိုင်ရန် ကျူဘီတစ်ခုတွင် ထုပ်ပိုးထားသည်။
fluorescence filter သည်မည်သို့အလုပ်လုပ်သနည်း။
စိတ်လှုပ်ရှားမှု စစ်ထုတ်မှု
Excitation filter များသည် သတ်မှတ်ထားသော လှိုင်းအလျားတစ်ခု၏ အလင်းကို ထုတ်လွှတ်ပြီး အခြားလှိုင်းအလျားများကို ပိတ်ဆို့သည်။ ၎င်းတို့ကို အရောင်တစ်မျိုးတည်းသာ ဖြတ်သန်းခွင့်ပြုရန် filter ကို ချိန်ညှိခြင်းဖြင့် မတူညီသောအရောင်များကို ထုတ်လုပ်ရန် ၎င်းတို့ကို အသုံးပြုနိုင်သည်။ စိတ်လှုပ်ရှားမှု စစ်ထုတ်ခြင်းများကို အဓိက အမျိုးအစား နှစ်မျိုးဖြင့် လာပါသည် — long pass filter နှင့် band pass filter များ။ Exciter သည် အများအားဖြင့် fluorophore မှ စုပ်ယူထားသော လှိုင်းအလျားများကိုသာဖြတ်သန်းသော bandpass filter တစ်ခုဖြစ်ပြီး၊ ထို့ကြောင့် အခြားသော fluorescence များ၏ စိတ်လှုပ်ရှားမှုကို နည်းပါးစေပြီး fluorescence emission band အတွင်းရှိ excitation light ကို ပိတ်ဆို့ထားသည်။ ပုံတွင် အပြာရောင်မျဉ်းဖြင့် ပြထားသည့်အတိုင်း BP သည် 460-495 ဖြစ်ပြီး ဆိုလိုသည်မှာ ၎င်းသည် 460-495nm ၏ fluorescence မှတဆင့်သာ ဖြတ်သန်းနိုင်သည်။
၎င်းကို fluorophore excitation range မှလွဲ၍ အလင်းရင်းမြစ်၏ လှိုင်းအလျားအားလုံးကို စစ်ထုတ်သည့် fluorescence microscope ၏ အလင်းရောင်လမ်းကြောင်းအတွင်းတွင် ထားရှိထားပါသည်။ အနိမ့်ဆုံး ထုတ်လွှင့်မှု filter သည် ပုံများ၏ တောက်ပမှုနှင့် တောက်ပမှုကို ညွှန်ပြသည်။ excitation filter တစ်ခုခုအတွက် အနည်းဆုံး 40% ဂီယာကို အကြံပြုထားပါသည် စစ်ထုတ်မှု၏ဗဟိုလှိုင်းအလျား (CWL) သည် ဖလိုဖလိုဖရီ၏ အထွတ်အထိပ် လှုံ့ဆော်မှုလှိုင်းအလျားနှင့် နီးစပ်နိုင်သမျှနီးနိုင်သောကြောင့် လှုံ့ဆော်မှုစစ်ထုတ်ခြင်း၏ လှိုင်းနှုန်းသည် fluorophore လှုံ့ဆော်မှုအကွာအဝေးအတွင်း လုံးလုံးရှိသင့်သည်။ စိတ်လှုပ်ရှားမှု စစ်ထုတ်ခြင်း အလင်းသိပ်သည်းဆ (OD) သည် နောက်ခံပုံ အမှောင်ကို ညွှန်ပြသည်။ OD သည် transmission range သို့မဟုတ် bandwidth ပြင်ပရှိ လှိုင်းအလျားများကို filter တစ်ခုက မည်မျှ ကောင်းမွန်စွာ ပိတ်ဆို့ထားသည်ကို တိုင်းတာခြင်းဖြစ်သည်။ OD ၏ အနည်းဆုံး 3.0 ကို အကြံပြုထားသော်လည်း OD ၏ 6.0 နှင့် အထက်သည် စံပြဖြစ်သည်။
ဓာတ်ငွေ့ထုတ်လွှတ်မှု စစ်ထုတ်ခြင်း
ဓာတ်ငွေ့ထုတ်လွှတ်မှု စစ်ထုတ်မှုများသည် နမူနာမှ နှစ်သက်ဖွယ်ကောင်းသော အလင်းရောင်ကို ထောက်လှမ်းသည့်ကိရိယာသို့ ရောက်ရှိစေရန် ရည်ရွယ်ချက်ဖြင့် ဆောင်ရွက်သည်။ ၎င်းတို့သည် ပိုတိုသော လှိုင်းအလျားများကို ပိတ်ဆို့ထားပြီး လှိုင်းအလျားရှည်ရန်အတွက် မြင့်မားသော ဂီယာများရှိသည်။ Filter အမျိုးအစားသည် ပုံရှိ BA510IF (ဝင်ရောက်စွက်ဖက်မှုအတားအဆီးစစ်ထုတ်ခြင်း) တွင် နံပါတ်တစ်ခုနှင့်လည်း ဆက်စပ်နေပါသည်၊ ထိုသတ်မှတ်ချက်သည် ၎င်း၏အမြင့်ဆုံးထုတ်လွှင့်မှု၏ 50% တွင် လှိုင်းအလျားကို ရည်ညွှန်းသည်။
လှုံ့ဆော်မှုစစ်ထုတ်ခြင်းများအတွက် တူညီသောအကြံပြုချက်များသည် ထုတ်လွှတ်မှုစစ်ထုတ်ခြင်းများအတွက် မှန်ကန်သည်- အနည်းဆုံး ထုတ်လွှင့်မှု၊ လှိုင်းနှုန်း၊ OD နှင့် CWL။ စံပြ CWL၊ အနိမ့်ဆုံး ထုတ်လွှင့်မှုနှင့် OD ပေါင်းစပ်မှုရှိသော ဓာတ်ငွေ့ထုတ်လွှတ်မှု စစ်ထုတ်မှုတစ်ခုသည် အနက်ရှိုင်းဆုံးဖြစ်နိုင်ချေရှိသော ပိတ်ဆို့ခြင်းနှင့်အတူ အတောက်ပဆုံးဖြစ်နိုင်ချေရှိသော ရုပ်ပုံများကို ပေးဆောင်ကာ အလင်းအဖျော့ဆုံးထုတ်လွှတ်မှုအချက်ပြမှုများကို သိရှိနိုင်စေရန် သေချာစေသည်။
Dichroic ကြေးမုံ
dichroic မှန်ကို excitation filter နှင့် emission filter အကြား 45° ထောင့်တွင် ထားရှိထားပြီး detector ဆီသို့ emission signal ကို ပို့နေစဉ် fluorophore ဆီသို့ excitation signal ကို ထင်ဟပ်စေသည်။ စံပြ dichroic filter များနှင့် beam splitter များသည် အများဆုံး ရောင်ပြန်ဟပ်မှုနှင့် အများဆုံး ထုတ်လွှင့်မှုကြားတွင် ပြတ်သားသော အသွင်ကူးပြောင်းမှုများ ရှိပြီး excitation filter ၏ bandwidth အတွက် >95% ရောင်ပြန်ဟပ်ပြီး emission filter ၏ bandwidth အတွက် >90% transmission ဖြစ်သည်။ ဖလိုရိုဖရီ၏ လမ်းဆုံလှိုင်းအလျား (λ) ဖြင့် ဇကာကို ရွေးချယ်ပါ၊ အလင်းမှိန်ဖျော့ဖျော့ဖျော့ဖျော့ဖျော့ပုံ signal-to-noise အချိုးကို အမြင့်ဆုံးဖြစ်စေရန် ရွေးချယ်ပါ။
ဤပုံရှိ dichroic mirror သည် DM505 ဖြစ်သောကြောင့် 505 nanometers သည် ဤမှန်အတွက် အများဆုံး ထုတ်လွှင့်မှု၏ 50% တွင် လှိုင်းအလျားဖြစ်သောကြောင့် ဖြစ်သည်။ ဤမှန်အတွက် ဂီယာမျဉ်းကွေးသည် 505 nm ထက် မြင့်မားသော ဂီယာကို ပြသသည်၊ 505 nanometers ဘယ်ဘက်သို့ မတ်စောက်သော ဂီယာကျဆင်းမှုနှင့် ဘယ်ဘက် 505 nanometers ၏ အမြင့်ဆုံးအလင်းပြန်မှုတို့ကို ပြသသော်လည်း 505 nm အောက်တွင် အချို့သော ဂီယာများ ရှိနေနိုင်ပါသည်။
Long Pass နှင့် Band Pass Filter များအကြား ကွာခြားချက်မှာ အဘယ်နည်း။
Fluorescence filter များကို long pass (LP) နှင့် band pass (BP) ဟူ၍ နှစ်မျိုးခွဲခြားနိုင်သည်။
Long pass filter များသည် ရှည်လျားသောလှိုင်းအလျားများကို ထုတ်လွှင့်ပြီး ပိုတိုသော အရာများကို ပိတ်ဆို့သည်။ ဖြတ်တောက်ထားသော လှိုင်းအလျားသည် အထွတ်အထိပ် ထုတ်လွှင့်မှု၏ 50% တွင် တန်ဖိုးဖြစ်ပြီး ဖြတ်-အွန်အထက် လှိုင်းအလျားအားလုံးကို long pass filters များမှ ပေးပို့ပါသည်။ ၎င်းတို့ကို dichroic mirrors နှင့် emission filter များတွင် မကြာခဏအသုံးပြုကြသည်။ အပလီကေးရှင်းသည် အများဆုံးထုတ်လွှတ်မှုစုဆောင်းမှုလိုအပ်သည့်အခါနှင့် ရောင်စဉ်တန်းခွဲခြားမှုကို နှစ်လိုဖွယ်မရှိသော သို့မဟုတ် မလိုအပ်သည့်အခါတွင်၊ ယေဘုယျအားဖြင့် တစ်ခုတည်းသောထုတ်လွှတ်သည့်မျိုးစိတ်များကိုထုတ်ပေးသည့် စူးစမ်းလေ့လာမှုများအတွက် ဖြစ်ရပ်မှန်များဖြစ်သည့် နောက်ခံ autofluorescence နည်းပါးသည့်နမူနာများတွင် အသုံးပြုရန် Longpass filter များကို အသုံးပြုသင့်သည်။
Band Pass စစ်ထုတ်သူများသည် အချို့သောလှိုင်းအလျားလှိုင်းတစ်ခုကိုသာ ထုတ်လွှင့်ပြီး အခြားအရာများကို ပိတ်ဆို့သည်။ ၎င်းတို့သည် fluorophore emission spectrum ၏ အပြင်းထန်ဆုံးသော အစိတ်အပိုင်းကိုသာ ထုတ်လွှင့်ရန်၊ autofluorescence ဆူညံသံကို လျှော့ချပေးပြီး၊ long pass filter များ မကမ်းလှမ်းနိုင်သော မြင့်မားသောနောက်ခံ autofluorescence နမူနာများတွင် signal-to-noise အချိုးကို မြှင့်တင်ခြင်းဖြင့် crosstalk ကို လျှော့ချပေးသည်။
BestScope မှ ပေးစွမ်းနိုင်သော fluorescence filter အမျိုးအစားမည်မျှရှိသနည်း။
အချို့သော အသုံးများသော filter များသည် အပြာ၊ အစိမ်း၊ နှင့် ခရမ်းလွန် filter များ ပါဝင်သည်။ ဇယားတွင်ပြထားသည့်အတိုင်း။
| Filter Set | စိတ်လှုပ်ရှားမှု စစ်ထုတ်မှု | Dichroic ကြေးမုံ | Barrier Filter | LED မီးလုံး လှိုင်းအလျား | လျှောက်လွှာ |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | · FITC- ရောင်ရမ်းမှု ပဋိပစ္စည်း နည်းလမ်း ·အက်ဆစ်လိမ္မော်ရောင်: DNA၊ RNA · Auramine: Tubercle bacillus ·EGFP၊ S657၊ RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | · Rhodamine၊ TRITC- ရောင်ရမ်းမှု ပဋိပစ္စည်းနည်းလမ်း · Propidium iodide: DNA · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · အလိုအလျောက် မီးချောင်းကို စောင့်ကြည့်ခြင်း။ · DAPI- DNA စွန်းထင်းခြင်း။ · Hoechest 332528, 33342- Chromosome စွန်းထင်းမှုအတွက် အသုံးပြုသည် |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | ·Catecholamines · 5-hydroxy tryptamine · Tetracycline- အရိုးစု၊ သွားများ |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | · Cy5 · Alexa Fluor 633၊ Alexa Fluor 647 |
fluorescence ဝယ်ယူမှုတွင်အသုံးပြုသည့် Filter set များသည် အသုံးအများဆုံး fluorophores ပတ်လည်ကိုအခြေခံထားသည့် fluorescence applications များတွင်အသုံးပြုသည့် အဓိကလှိုင်းအလျားများပတ်လည်ဒီဇိုင်းပြုလုပ်ထားသည်။ ထို့ကြောင့် ၎င်းတို့ကို DAPI (အပြာ)၊ FITC (အစိမ်းရောင်) သို့မဟုတ် TRITC (အနီရောင်) filter cubes ကဲ့သို့သော ပုံရိပ်ဖော်ရန်အတွက် ရည်ရွယ်ထားသော ဖလိုရိုဖီးယားကိုလည်း နာမည်ပေးထားသည်။
| Filter Set | စိတ်လှုပ်ရှားမှု စစ်ထုတ်မှု | Dichroic ကြေးမုံ | Barrier Filter | LED မီးလုံး လှိုင်းအလျား |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| တက္ကနီ | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
fluorescence filter ကို ဘယ်လိုရွေးချယ်မလဲ။
1. fluorescence filter ကိုရွေးချယ်ခြင်း၏နိယာမမှာ fluorescence/emission light သည် ပုံရိပ်ဖော်ခြင်းအဆုံးကို တတ်နိုင်သမျှ ဖြတ်သွားစေရန်နှင့် အမြင့်ဆုံး signal-to-noise ratio ကိုရရှိရန်အတွက် တစ်ချိန်တည်းတွင် excitation light ကို လုံးဝပိတ်ဆို့ထားရန်ဖြစ်သည်။ အထူးသဖြင့် multiphoton excitation နှင့် total internal reflection microscope ကို အသုံးပြုခြင်းအတွက်၊ အားနည်းသော ဆူညံမှုသည် ပုံရိပ်ဖော်အကျိုးသက်ရောက်မှုကို ကြီးစွာသော အနှောင့်အယှက်ဖြစ်စေသောကြောင့် signal to noise ratio အတွက် လိုအပ်မှုသည် ပိုမိုမြင့်မားပါသည်။
2. ဖလိုရိုဖရီ၏ စိတ်လှုပ်ရှားမှုနှင့် ထုတ်လွှတ်သည့် ရောင်စဉ်ကို သိပါ။ အနက်ရောင်နောက်ခံဖြင့် အရည်အသွေးမြင့်၊ ခြားနားမှုမြင့်မားသော ရုပ်ပုံတစ်ပုံကို ထုတ်ပေးသည့် fluorescence filter အစုံကို တည်ဆောက်ရန်အတွက်၊ စိတ်လှုပ်ရှားမှုနှင့် ထုတ်လွှတ်မှု filter များသည် fluorophore လှုံ့ဆော်မှု အမြင့်ဆုံး သို့မဟုတ် ထုတ်လွှတ်မှုများနှင့် သက်ဆိုင်သည့် ဒေသများတစ်လျှောက် ပတ်စ်ဘန်းလှိုင်းအနည်းငယ်ဖြင့် မြင့်မားသော ဂီယာကိုရရှိသင့်သည်။
3. fluorescence filter များ၏ကြာရှည်ခံမှုကို ထည့်သွင်းစဉ်းစားပါ။ အထူးသဖြင့် အလင်းရောင်အရင်းအမြစ်၏ ပြင်းထန်မှုအပြည့်ဖြင့် "လောင်ကျွမ်းခြင်း" ကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည့် ခရမ်းလွန်ရောင်ခြည်ကို ထုတ်ပေးသည့် ပြင်းထန်သောအလင်းရင်းမြစ်များအတွက် ဤစစ်ထုတ်ခြင်းများသည် မလွတ်စဥ်စေရပါ။
ကွဲပြားသော ရောင်ရမ်းမှု နမူနာပုံများ
အရင်းအမြစ်များကို အင်တာနက်ပေါ်တွင် စုဆောင်းပြီး စုစည်းထားပြီး သင်ယူမှုနှင့် ဆက်သွယ်ရေးအတွက်သာ အသုံးပြုပါသည်။ ချိုးဖောက်မှုတစ်စုံတစ်ရာရှိပါက ဖျက်ရန် ကျွန်ုပ်တို့ထံ ဆက်သွယ်ပါ။
စာတိုက်အချိန်- ဒီဇင်ဘာ-၀၉-၂၀၂၂